質粒小量快速提取試劑盒
Rapid Mini Plasmid Kit
產品信息：
試劑盒組成 | 保存 | DP101-01 100 次 | DP101-02 200 次 |
平衡液BL |
室溫 |
60ml |
120ml |
RNaseA（10mg/ml） | 室溫 | 300µl | 300µl×2 |
溶液 P1 | 4℃ | 30ml | 30ml×2 |
溶液 P2 | 室溫 | 30ml | 30ml×2 |
溶液 P3 | 室溫 | 40ml | 40ml×2 |
漂洗液WB |
室溫 | 25ml 25ml×2 第-次使用前按說明加指—*定量乙醇 | |
洗脫緩沖液 EB | 室溫 | 15ml | 10ml×2 |
吸附柱AC | 室溫 | 100 個 | 200 個 |
收集管（2ml） | 室溫 | 100 個 | 200 個 |
保存條件：本試劑盒在室溫儲存 18 個月不影響使用效果。
產品介紹：
本試劑盒采用改進 SDS-堿裂解法裂解細胞，離心吸附柱內的硅基質膜在高鹽、低pH 值狀
態下選擇性地
結合溶液中的質粒DNA，再通過漂洗液將雜質和其它細菌成分去除，后低鹽、高 pH 值
的洗脫緩沖液
將純凈質粒DNA 從硅基質膜上洗脫。
產品特點：：
1. 離心吸附柱內硅基質膜全部采用進口特制吸附膜，柱與柱之間吸附量差異極小，可重復
性好。克服了國產試劑盒膜質量不穩定的弊端。
快速、方便，不需要使用有毒的苯酚、氯-*仿等試劑，也不需要乙醇沉淀。獲得的質粒產量高、純度好，可以直接用于酶切、轉化、PCR、體外轉錄、測序等各種分子生物學實驗。
注意事項：
1.第-次使用時，將試劑盒所帶的全部 RNase A 加入溶液 P1 后（終濃度 100ug/ml） 于 2-8℃保存。如果溶液 P1 中 RNase A 失活，提取的質粒可能會有微量 RNA 殘留， 在溶液 P1 中補加 RNase A 即可。
2.環境溫度低時溶液 P2 中 SDS 可能會析出渾濁或者沉淀，可在 37℃水浴加熱幾分鐘， 即可恢復澄清，不要劇烈搖晃，以免形成過量的泡沫。
3.避免試劑長時間暴露于空氣中產生揮發、氧化、pH 值變化。
4.本試劑盒適用菌株為 XL-1 Blue 和 DH5a 等核酸酶含量低缺陷型菌株。所用菌株為JM 系列、HB101 等 endA 菌株或野生型菌株，核酸酶含量豐富，應購買本公司生產的高純度質粒小量快速提取試劑盒。
5.溶液 P3 中含有刺激性化合物，操作時要戴乳膠手套，避免沾染皮膚、眼睛和衣服。若沾染皮膚、眼睛時，要用大量清水或者生理鹽水沖洗。提取質粒的量與細菌培養濃度、質粒拷貝數等因素有關。一般高拷貝質粒，建議接種單菌落于 1.5-4.5ml 加合適抗生素的 LB 培養基，過夜培養 14-16 個小時，可提取出多達 20µg 的純凈質粒。如果所提質粒為低拷貝質粒或大于 10kb 的大質粒，應適當加大菌體使用量，使用 5-10ml 過夜培養物，同時按比例增加 P1、P2、P3 的用量，其它步驟相同。
6.得到的質粒 DNA 可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計檢測濃度與純度。OD260 值為 1 相當于大約 50μg/ml DNA。電泳可能為單一條帶，也可能為 2 條或者多條 DNA 條帶，這主要是不同程度的超螺旋構象質粒泳動位置不一造成，與提取物培養時間長短、提取時操作劇烈程度等有關。本公司產品正常操作情況下基本超螺旋可以超過 90%。
7. 洗脫液 EB 不含有螯合劑 EDTA，不影響下游酶切、連接等反應。也可以使用水洗脫， 但應該確保 pH 大于 7.5，pH 過低影響洗脫效率。用水洗脫質粒應該保存在-20℃。質粒DNA 如果需要長期保存，可以用 TE 緩沖液洗脫（10mM Tris-HCl，1mM EDTA， pH 8.0），但是 EDTA 可能影響下游酶切反應，使用時可以適當稀釋。
自備試劑：無水乙醇
操作步驟：
提示：
ð 第--次使用前請先在漂洗液 WB 中加入指-*定量無水乙醇，充分混勻，加入后請及時在
方框打鉤標記已加入乙醇，以免多次加入!
ð 將 RNase A 全部加入溶液 P1 中，混勻，每次使用后置于 2-8℃保存。
ð 將溶液 P3 放在冰上預冷，可以提高產量。
1. 向吸附柱 AC 中（吸附柱放入收集管中）加 500μl 的平衡液 BL，12,000pm 離心 1 min，倒掉
收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。
2. 取 1.5-4.5ml 過夜培養的菌液 12,000rpm 離心 30 sec，盡可能的倒干上清，收集菌體。
3. 用 250μl 溶液 P1 重懸菌體沉淀，渦旋振蕩至*懸浮。
4. 加 250μl 的溶液 P2，溫和地上下翻轉 4 -7 次使菌體充分裂解。
5. 加 350μl 溶液 P3，立即溫和地上下翻轉 4-7 次，充分混勻時會出現白色絮狀沉淀，
12,000rpm 離心 5 min，小心取上清。
6. 將上一步所得上清加入吸附柱 AC 中（吸附柱放入收集管中），12,000rpm 離心30-60 sec，
倒掉收集管中的廢液。
7. 加入 500μl 漂洗液 WB（請先檢查是否已加入無水乙醇!），12,000rpm 離心 30 sec，棄
掉廢液。
8. 重復步驟 7。
9. 將吸附柱 AC 放回空收集管中，12,000rpm 離心 2 min，將吸附柱置于室溫放置數分鐘，
以*晾干吸附材料中殘余的漂洗液, 以免漂洗液中殘留乙醇抑制下游反應。10.取出吸附
柱 AC，放入一個干凈的離心管中，室溫放置 10 min。
11.在吸附膜的中間部位加 50μl-100μl 洗脫緩沖液 EB（洗脫緩沖液事先在 65-70℃水浴中加熱
效果更好），室溫放置 2 min，12,000rpm 離心 1 min。如果需要較多量質粒，可將得到的溶液
重新加入離心吸附柱中，離心1 min。洗脫體積越大，洗脫效率越高。如果需要質粒濃度較
高，可以適當減少洗脫體積， 但是小體積不應少于 30μl，體積過小降低質粒洗脫效
率，減少質粒產量。洗脫液的 pH 值對于洗脫效率有很大影響。
實驗代做服務：
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