| 更新時(shí)間： | 2025-12-13 |
| 訪問(wèn)量： | 938 |
| 廠商性質(zhì)： | 生產(chǎn)廠家 |
人細(xì)胞凋亡酶聯(lián)免疫檢測(cè)(ELISA)試劑盒--打折銷(xiāo)售中，價(jià)格合適，咨詢(xún)！
人細(xì)胞凋亡酶聯(lián)免疫檢測(cè)（ELISA）
試劑盒使用說(shuō)明書(shū)
l 僅用于科研，不得用于臨床診斷！
l 用于定量檢測(cè)人血清、血漿及其他相關(guān)液體樣本中細(xì)胞凋亡的含量。
l 有效期：6個(gè)月。
l 保存條件：2
使用前請(qǐng)仔細(xì)閱讀說(shuō)明書(shū)！
實(shí)驗(yàn)原理：
本試劑盒應(yīng)用生物素雙抗體夾心法測(cè)定樣品中人細(xì)胞凋亡水平。向預(yù)先包被了人細(xì)胞凋亡單克隆抗體的酶標(biāo)孔中加入細(xì)胞凋亡，溫育；溫育后，加入生物素標(biāo)記的抗細(xì)胞凋亡抗體。再與鏈霉親和素-HRP結(jié)合，形成免疫復(fù)合物，再經(jīng)過(guò)溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶，然后加入底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的細(xì)胞凋亡呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值），通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中人細(xì)胞凋亡的濃度。
試劑盒組成
| 試劑盒組成： | 48孔配置 | 96孔配置 |
| 說(shuō)明書(shū) | 1份 | 1份 |
| 封板膜 | 2片（48） | 2片（96） |
| 密封袋 | 1個(gè) | 1個(gè) |
| 酶標(biāo)包被板 | 1×48 | 1×96 |
| 標(biāo)準(zhǔn)品：32ng/ml | 0.5ml×1瓶 | 0.5ml×1瓶 |
| 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 | 3ml×1瓶 | 6ml×1瓶 |
| 鏈霉親和素-HRP | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 |
| 生物素標(biāo)記的抗Apoptosis抗體 | 0.5ml×1瓶 | 1 ml×1瓶 |
| 顯色劑A液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 |
| 顯色劑B液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 |
| 終止液 | 3ml×1瓶 | 6ml×1瓶 |
| 濃縮洗滌液 | （20ml×20倍）×1瓶 | （20ml×30倍）×1瓶 |
注意事項(xiàng)：
1． 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2． 濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。
3． 各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。
4． 請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高（樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD值），請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測(cè)定，計(jì)算時(shí)請(qǐng)zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n）。
5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6． 底物請(qǐng)避光保存。
7． 嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
8． 所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9． 本試劑不同批號(hào)組分不得混用。
需要而未提供的試劑和器材：
1．
2． 標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀。
3． 精密移液器及一次性吸頭
4． 蒸餾水，
5． 一次性試管
6． 吸水紙
樣本處理及要求：
1. 血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過(guò)程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。
2. 血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)該再次離心。
3. 尿液：用無(wú)菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。
4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清：檢測(cè)分泌性的成份時(shí)，用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復(fù)凍融，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
5. 組織標(biāo)本：切割標(biāo)本后，稱(chēng)取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩?biāo)本融化后仍然保持2
6. 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于
7. 不能檢測(cè)含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性。。
操作程序
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋?zhuān)海ū驹噭┖刑峁┰稑?biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。）
| 16ng/ml | 5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 | 150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 |
| 8 ng/ml | 4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 | 150μl的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 |
| 4 ng/ml | 3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 | 150μl的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 |
| 2ng/ml | 2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 | 150μl的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 |
| 1 ng/ml | 1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 | 150μl的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 |
2. 根據(jù)代測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來(lái)定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。
3. 將稀釋好的標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度由高到低或者由低到高依次加入酶標(biāo)包被板孔中。
4. 分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品、生物素標(biāo)記的抗Apoptosis抗體及鏈霉親和素-HRP，其余各步操作相同）及待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品40μl，然后再加生物素標(biāo)記的抗Apoptosis抗體10μl。加樣時(shí)將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。
5. 溫育：用封板膜封板后置
6. 配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋后備用。
7. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
8. 加酶：每孔加入鏈霉親和素-HRP 50μl，空白孔除外。
9. 溫育：操作同5。
10. 洗滌：操作同7。
11. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，
12. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
13. 測(cè)定：以空白孔調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后10分鐘以?xún)?nèi)進(jìn)行。
實(shí)驗(yàn)操作流程圖：
準(zhǔn)備試劑，樣品和標(biāo)準(zhǔn)品 加入準(zhǔn)備好的標(biāo)準(zhǔn)品和樣品，生物素標(biāo)記的二抗， 洗板5次，加入鏈霉親和素-HRP，空白孔除外， 洗板5次，加入顯色劑A和B，37℃反應(yīng)15分 加入終止液后讀數(shù) 計(jì) 算
計(jì) 算：
以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo) 準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋
倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。
